Хлорамфеникол (CHL), дексаметазон натрия фосфат (DSP) и тетрагидрозолин HCl (THZ) входят в состав препаратов для лечения конъюнктивита. Тройную смесь невозможно определить одновременно из-за сильного перекрытия их спектров поглощения нулевого порядка. Разработаны простые и проверенные УФ-спектрофотометрические методы определения CHL, DSP и THZ в их чистых и офтальмологических лекарственных формах, причем только CHL непосредственно определялся при 284.0 нм в диапазоне 4.0–36.0 мкг/мл, в то время как DSP и THZ определены с помощью спектрофотометрических методов отношения производных с одним или двумя делителями. Для спектрофотометрического метода пересечения нуля и отношения производных с одним делителем (SDDR-ZC) 4.0 мкг/мл CHL использовали в качестве единственного делителя, где DSP и THZ детектировались при 272.0 и 239.0 нм. DSP и THZ показали линейность в диапазонах 4.0–32.0 и 3.0–24.0 мкг/мл. Для спектрофотометрического метода двойного делителя отношения производных (DD-DR), (12.0 мкг/мл CHL и 12.0 мкг/мл THZ) и (12.0 мкг/мл CHL и 12.0 мкг/мл DSP) использовались в качестве двойных делителей для количественной оценки DSP и THZ. DSP и THZ показали линейность в диапазоне 4.0–32.0 мкг/мл и обнаружены при 258.0 и 237.0 нм. Разработанные методики успешно применены для определения трех лекарственных препаратов в их лекарственной форме. Методы прошли валидацию, показав отсутствие значительных различий при статистическом сравнении с методом ВЭЖХ.