Комбинированные системы полимеразной цепной реакции и иммуноанализа с времяразрешенной флуориметрией или мембранной иммунохроматографией для количественного определения ДНК бактерий Salmonella enterica

Серченя Т. С., Охремчук Е. В., Валентович Л. Н., Лапина В. С., Свиридов О. В.
2024

Разработаны и исследованы четыре модельные биоаналитические системы, специфичные к бактериям Salmonella enterica, в которых в результате полимеразной цепной реакции (ПЦР) продуцировался содержащий остатки биотина и флуоресцеина ампликон ДНК. Это позволило иммобилизовать ампликон в функционализиро- ванной твердой фазе и биоспецифически пометить хелатом европия в микропланшетах или золотыми наночастицами на хроматографической мембране. Количественная детекция модифицированной ДНК осуществлялась в системах иммуноанализа с времяразрешенной флуоресценцией Eu3+ (лантанидный иммунофлуоресцентный анализ, ЛИФМА, DELFIA) или с фотометрией окрашенной зоны на хроматографической полоске (ИХА). Разработаны и исследованы три пары праймеров для получения выбранных фрагментов гена invA, присутствующего в геномах всех патогенных сальмонелл. Установлена их пригодность для тест-систем. В микропланшетной системе ЛИФМА диапазон определяемых концентраций полученного ампликона ДНК составил 0,01–10,0 нМ, а предел обнаружения оказался равным 2 пМ. Предел визуальной детекции ампликонов ДНК в ИХА составил 0,05 нМ. Показана возможность проведения тестирования ампликонов без дополнительного выделения ДНК в чистом виде из реакционной смеси. Установлена высокая специфичность разработанных биоаналитических систем для детекции Salmonella enterica различных серотипов.

Серченя Т. С., Охремчук Е. В., Валентович Л. Н., Лапина В. С., Свиридов О. В. Комбинированные системы полимеразной цепной реакции и иммуноанализа с времяразрешенной флуориметрией или мембранной иммунохроматографией для количественного определения ДНК бактерий Salmonella enterica. Известия Национальной академии наук Беларуси. Серия химических наук. 2024;60(4):314-325. https://doi.org/10.29235/1561-8331-2024-60-4-314-325
Цитирование

Список литературы

Похожие публикации

Источник