17 Бритиков В. В. Панкратова Е. В. Усанов С. А. ЯМР спектроскопия РПН-ЯМР цитохром Р450cam 4-фенилимидазол белок-лигандное взаимодействие резонансный перенос энергии разностное спектрофотометрическое титрование диссоциация комплекса промежуточное короткоживущее состояние лиганда 2017 2017-12-17 Доклады Национальной академии наук Беларуси Настоящая работа посвящена исследованию взаимодействия цитохрома P450cam c 4-фенилимидазолом (4-PI) методом спектрофотометрии и ЯМР спектроскопии. Полученные методом разницы переноса насыщения ЯМР (РПН-ЯМР) данные указывают на существование промежуточного короткоживущего состояния 4-фенилимидазола в активном сайте P450cam, где 4-фенилимидазол связан с внутренней областью активного сайта и/или областью канала доступа субстрата без образования координационной связи между атомами азольной группы лиганда и атомом железа гема. В данной работе нами впервые применен метод РПН-ЯМР для исследования взаимодействия цитохрома P450 c лигандом. Равновесная константа диссоциации комплекса P450cam–4-PI, рассчитанная с использованием зависимости фактора амплификации РПН при нулевом времени насыщения, составляет 10,4 мМ и отличается от константы, рассчитанной при постоянном времени насыщения (34,6 мМ), что указывает на зависимость определения Kd при использовании РПН-ЯМР от времени насыщения и концентраций взаимодействующих веществ. Сравнение энергии диссоциации для промежуточного комплекса (11,2 кДж) относительно комплекса с прямой координацией (28,5 кДж) позволяет предположить, что основной вклад во взаимодействие белок–лиганд вносит гидрофобное взаимодействие 4-PI с внутренней поверхностью полости активного сайта Р450cam. Обнаруженное промежуточное состояние позволяет объяснить образование гидроксилированных форм ингибиторов азольной природы при взаимодействии с цитохромами P450, когда ингибитор находится в промежуточной форме в качестве субстрата, без образования координационной связи с атомом железа гема.  https://www.academjournals.by/publication/2824 https://www.academjournals.by/files/2808