RT - article
SR - Electronic
T1 - Создание штамма-продуцента химерного белка, состоящего из РНК-полимеразы и ДНК-аффинного домена
JF - Доклады Национальной академии наук Беларуси
SP - 2018-10-30
DO - 10.29235/1561-8323-2018-62-5-601-607
A1 - Казловский И. С., 
A1 - Зинченко А. И., 
YR - 2018
UL - https://www.academjournals.by/publication/2728
AB - Одним из новых перспективных направлений молекулярной биотехнологии является бесклеточный синтез белка. Процедура бесклеточного синтеза белка основана на реконструкции in vitro всех этапов биосинтеза белка в клетке, включая транскрипцию, аминоацилирование тРНК и трансляцию мРНК рибосомами. Для воспроизведения этапа транскрипции требуется участие специфических РНК-полимераз, которые инициируют процесс синтеза мРНК с определенных сайтов узнавания. Часто для этого применяется ДНК-зависимая РНК-полимераза бактериофага Т7 (Т7-РНК-полимераза). Для улучшения качественных характеристик Т7-РНК-полимеразы в настоящей работе создан новый штамм Escherichia coli, продуцирующий этот фермент, слитый с ДНК-аффинным доменом Sso7d термофильной бактерии Sulfolobus solfataricus. Продуцирующая способность полученного рекомбинантного штамма в отношении синтезируемого химерного белка достигает 625 ед/л культуральной жидкости, а удельная активность препарата очищенного фермента составила 80 ед/мкг белка. Полученный фермент предназначен для использования в качестве инструментария при синтезе белков в бесклеточной системе.