PT - JOURNAL ARTICLE
AU - Бритиков В. В., 
AU - Бритикова Е. В., 
AU - Бочаров Э. В., 
AU - Бершацкий Я. В., 
AU - Кузьмина Н. В., 
AU - Бойко К. М., 
AU - Усанов С. А., 
TI - Физико-химические свойства Δ3−12 цистеин-обедненного цитохрома P450 3A4 с аминокислотной заменой S291C
DP - 2022-05-06
TA - Доклады Национальной академии наук Беларуси
4100 - 10.29235/1561-8323-2022-66-2-176-186
SO - https://www.academjournals.by/publication/2328
AB - Цитохром P450 3A4 (3A4) экспрессируется в клетках печени человека и играет ключевую роль в метаболизме ксенобиотиков, в том числе и более 50 % лекарственных препаратов. Регуляция активности данного фермента может происходить на уровне экспрессии генов, а также на уровне конформационного состояния структуры самого белка, за счет изменения молекулярного окружения, в том числе за счет взаимодействия с высокомолекулярными эффекторами. Понимание изменения структуры и динамики 3A4 в ответ на изменение условий среды необходимо для предсказания изменения уровня его активности, который в значительной степени обуславливает гомеостаз организма. Для проведения in vitro экспериментов по исследованию структуры, динамики и белоклигандных/белковых взаимодействий ферментов современными спектральными методами используется подход, в котором в целевой белок селективно вводятся методами белковой инженерии цистеиновые остатки в заданные локусы полипептидной цепи для последующего мечения специализированными молекулярными метками. Для этих целей в данной работе была получена мутантная форма мембрансвязанного (полноразмерного) рекомбинантного цитохрома P450 3A4 человека C58A/C64M/C98A/C239T/C377A/C468S/S291C. По данным спектроскопии кругового дихроизма нами было установлено, что введенные мутации не вызывают значимых изменений во вторичной структуре полученной формы 3A4, что свидетельствует о сохранении свернутости полипептидной цепи. Проведены спектрофотометрические измерения для сравнительного анализа изменения сродства к лигандам активного центра. Более того, нами было показано, что тестостерон гидроксилирующая активность в in vitro реконструированной системе для данной мутантной формы 3A4 многократно увеличивается относительно дикой формы фермента.