PT - JOURNAL ARTICLE
AU - Слизень В. В., 
AU - Суркова Л. К., 
AU - Гуревич Г. Л., 
TI - Использование ПЦР с гидролизными зондами для выявления мутаций устойчивости к фторхинолонам у Mycobacterium tuberculosis
DP - 2023-06-05
TA - Известия Национальной  академии наук Беларуси. Серия медицинских наук
4100 - 10.29235/1814-6023-2023-20-2-158-167
SO - https://www.academjournals.by/publication/14511
AB - Ранняя диагностика резистентности к фторхинолонам дает возможность своевременно начать адекватную терапию и повышает шансы на благоприятный исход заболевания. Использование молекулярно-генетических методов исследования позволяет получить в течение 1–2 сут результаты определения устойчивости Mycobacterium tuberculosis к противотуберкулезным лекарственным средствам, в то время как при использовании классических методов результаты становятся известны почти через 1–2 мес. Цель работы – разработка метода детекции M. tuberculosis и точечных мутаций в 90, 91, 94-м кодонах gyrA гена, ассоциированных с устойчивостью к фторхинолонам. Исследовано 88 культур микобактерий: M. tuberculosis (n = 81), M. tuberculosis H37Rv, M. chelonae (n = 1), M. gordonae (n = 1), M. fortuitum (n = 1) и 3 изолята других нетуберкулезных микобактерий. Типы мутаций в гене gyrA изучены с помощью разработанного метода ПЦР в реальном времени, стандартного метода GenoType MTBDRsl (HAIN, Германия) и секвенирования по Сэнгеру. Анализ мутаций в gyrA гене 78 изолятов M. tuberculosis показал, что доминирующими были мутации p.Asp94Gly и p.Ala90Val, которые идентифицированы у 21 и 27 изолятов соответственно: в структуре мутаций на их долю приходится 64 %. У M. tuberculosis встречались также мутации p.ASP94ALA и p.ASP94TYR/HIS – у 6 (8,0 %) и 9 (12,0 %) изолятов соответственно. У одного штамма присутствовала мутация в 88-м кодоне и у одного штамма найдена двойная мутация (ALA90VAL и ASP94GLY). Результаты по выявлению мутаций разработанным методом ПЦР в реальном времени совпадают с результатами GenoType MTBDRsl и секвенирования. Разработанный метод ПЦР в реальном времени демонстрирует высокую частоту совпадений с данными фенотипического определения устойчивости к офлоксацину и результатами тестирования с помощью стандартного метода GenoType MTBDRsl и секвенирования. С помощью данного метода можно выявлять возбудителей туберкулеза, дискриминировать мутации p.ALA90VAL, p.SER91PRO, p.ASP94ALA, p.ASP94TYR/HIS, p.ASP94GLY, p.ASP94ASN, что позволяет диагностировать устойчивость к фторхинолонам.