@article{Гилевич С. Н.2021-12-03,
author = { Гилевич С. Н.,  Бречко Ю. В.},
title = {Получение и характеристика рекомбинантной глутатионтрансферазы Р1 человека и скрининг новых ингибиторов фермента},
year = {2021},
doi = {10.29235/1561-8331-2021-57-4-438-455},
publisher = {NP «NEICON»},
abstract = {Глутатионтрансфераза Р1 человека (GSTP1) играет важную роль во второй фазе биотрансформации ксенобиотиков и в регуляции апоптотических сигнальных путей. Направленный скрининг новых ингибиторов фермента является актуальной задачей, так как избирательное подавление активности GSTP1 в опухолевых клетках может существенно повысить их чувствительность к химиотерапии. Известные методы получения рекомбинантной GSTP1 с гексагистидиновым тэгом в структуре отличаются сложностью, трудоемкостью и значительными потерями активности фермента. С целью создать простую и эффективную систему бактериальной экспрессии бестэговой GSTP1 с нативной структурой и высокой активностью, в настоящей работе проведено клонирование полноразмерного гена gstp1 в плазмидный вектор pTXB1 с последующей трансформацией клеток E. coli. Оптимизированный уровень экспрессии составил 30–32 мг фермента/л среды. С использованием глутатионсодержащих аффинных мембран из бактериального лизата выделен очищенный фермент (выход 75,7 %, удельная активность 102,6 Ед/мг белка). Гомогенность препарата подтверждена данными гель-электрофореза и масс-спектрометрии. Физико-химические и каталитические свойства рекомбинантной GSTP1 практически совпали с таковыми для нативного фермента из эритроцитов. По результатам скрининга in silico и in vitro выявлены структурные факторы и взаимодействия, определяющие эффективность ингибирования фермента карбо- и N-гетероциклическими лигандами. Установлена предпочтительная ориентация «хороших» ингибиторов в Н-сайте GSTP1. Обнаружены новые ингибиторы фермента: 1,10-фенантролин-5,6-дион, ализариновый красный С и индигокармин с величиной IC50 соответственно 31, 16 и 2,3 мкМ. Найденные соединения представляют интерес для создания новых лидерных структур с потенциальной противоопухолевой активностью.},
URL = {https://www.academjournals.by/publication/12179},
eprint = {https://www.academjournals.by/files/12145},
journal = {Известия Национальной академии наук Беларуси. Серия химических наук},
}