17 Шишлова-Соколовская А. М. Урбанович О. Ю. система CRISPR/Cas9 гидовая РНК PAM pRGEB31 NtPDS Nicotiana tabacum 2024 2024-11-06 10.29235/1029-8940-2024-69-4-298-308 Известия Национальной академии наук Беларуси. Серия биологических наук Система CRISPR/Cas9 является одним из эффективных инструментов для редактирования геномов растений. С помощью этой системы нами получены трансформанты Nicotiana tabacum с различным фенотипом, несущие в своем геноме мутационные события инсерционно-делеционного типа в гене PDS, кодирующем фермент 15-цис-фитоендесатуразу. Эндогенный ген табака NtPDS был выбран в качестве мишени, так как внесение мутаций в его нуклеотидную последовательность позволяет легко визуализировать признаки. Тетрааллельный нокаут гена NtPDS приводил к полному альбинизму растений. Трансформанты-альбиносы отличались более медленным ростом, карликовостью и были нежизнеспособны при культивировании in vitro. Мутанты с пестролистностью в культуре in vitro образовывали корни и не отличались от контрольных растений по размеру листьев. Анализ нуклеотидной последовательности протоспейсера гена мишени NtPDS был выполнен на случайной выборке, включавшей 21 трансгенное растение поколения Т0 с различным фенотипом – от полностью альбиносного до дикого типа. Результаты секвенирования показали, что все трансформанты с видимыми фенотипическими проявлениями несут мутантные последовательности в гене NtPDS с частотой 51,0‒80,0 %, при этом эффективность направленного мутагенеза составила 33,33 %. У трансформантов с фенотипом дикого типа не обнаружено мутированных последовательностей в мишени. https://www.academjournals.by/publication/11393 https://www.academjournals.by/files/11359